茨城病和鹿流行性出血病概述
茨城?。↖baraki Disease）和鹿流行性出血病（Epizootic Hemorrhagic Disease, EHD）是兩種由不同病毒引起的重要?jiǎng)游镆卟?，主要影響反芻動(dòng)物，尤其是牛和鹿。茨城病由茨城病毒（Ibaraki Virus）引發(fā)，屬于呼腸孤病毒科，通過蚊蟲等媒介傳播，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、口腔潰瘍及吞咽困難；鹿流行性出血病則由EHD病毒（EHDV）導(dǎo)致，屬于環(huán)狀病毒屬，癥狀包括高熱、黏膜出血和內(nèi)臟損傷。這兩種疫病具有高傳染性和潛在的經(jīng)濟(jì)損失風(fēng)險(xiǎn)，因此快速、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室檢測對疫病防控至關(guān)重要。瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）作為一種經(jīng)典的血清學(xué)檢測方法，因操作簡便、成本較低，被廣泛應(yīng)用于病毒抗原或抗體的篩查。
檢測項(xiàng)目
瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）的檢測項(xiàng)目主要包括以下兩類：
1. 病毒抗原檢測：通過特異性抗體與樣本中的病毒抗原結(jié)合，形成可見的沉淀線，用于直接確認(rèn)病原存在。
2. 血清抗體檢測：利用已知病毒抗原檢測動(dòng)物血清中的特異性抗體，評估感染狀態(tài)或免疫應(yīng)答水平。
針對茨城病和鹿流行性出血病，需分別使用對應(yīng)病毒的已知抗原或高免血清作為反應(yīng)試劑，確保檢測的特異性。
檢測儀器與試劑
AGID試驗(yàn)的核心儀器與試劑包括：
- 瓊脂糖凝膠板：通常使用1%-2%的瓊脂糖溶液，以pH 8.6的緩沖液（如Tris-EDTA）配制。
- 微量加樣器及打孔器：用于精確加樣和制備凝膠孔（中央1孔，周圍6孔對稱排列）。
- 病毒抗原和標(biāo)準(zhǔn)陽性血清：需符合OIE（世界動(dòng)物衛(wèi)生組織）或國家標(biāo)準(zhǔn)的商品化試劑。
- 濕盒及恒溫培養(yǎng)箱：維持37℃恒溫環(huán)境，促進(jìn)抗原抗體擴(kuò)散反應(yīng)。
- 紫外觀察儀或染色設(shè)備：輔助沉淀線的識別與結(jié)果判讀。
檢測方法與步驟
AGID試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)操作流程如下：
1. 制膠與打孔：將瓊脂糖加熱溶解后倒入平皿，凝固后用打孔器形成中央孔及外周孔（孔徑3-5mm）。
2. 加樣：中央孔加入已知抗原（或抗體），外周孔依次加入待測樣本、陽性對照和陰性對照。
3. 擴(kuò)散反應(yīng)：將凝膠板置于濕盒中，37℃孵育24-48小時(shí)，使抗原抗體在凝膠中自由擴(kuò)散并形成復(fù)合物。
4. 結(jié)果判讀：肉眼觀察或染色后，若待測孔與中央孔間出現(xiàn)清晰的白色沉淀線，則判定為陽性。
檢測標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量控制
為確保檢測結(jié)果的可靠性，需遵守以下標(biāo)準(zhǔn)：
- 國際標(biāo)準(zhǔn)：參考OIE《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)與疫苗手冊》中關(guān)于病毒性出血病的AGID操作規(guī)范。
- 試劑驗(yàn)證：抗原和抗體的效價(jià)需符合說明書要求，每批次試驗(yàn)應(yīng)包含陽性和陰性對照。
- 交叉反應(yīng)排除：茨城病與EHD病毒存在血清學(xué)交叉可能，必要時(shí)需結(jié)合PCR或病毒分離進(jìn)行確認(rèn)。
- 結(jié)果記錄：沉淀線的清晰度、位置需詳細(xì)記錄，模糊或非特異性反應(yīng)需重復(fù)檢測。
通過規(guī)范的AGID檢測，能夠高效篩查茨城病和鹿流行性出血病，為疫病監(jiān)測、免疫評估及防控決策提供重要依據(jù)。然而，該方法靈敏度較低，對早期感染或低濃度樣本可能出現(xiàn)假陰性，臨床中常與其他方法（如ELISA、分子檢測）聯(lián)合使用以提高準(zhǔn)確性。
CMA認(rèn)證
檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認(rèn)可
實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認(rèn)證
質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書
證書編號：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
掃一掃，更多精彩
