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馬傳染性貧血病間接ELISA診斷檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間：2025-07-24 22:15:28

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

馬傳染性貧血病間接ELISA診斷檢測(cè)概述

馬傳染性貧血病（Equine Infectious Anemia, EIA）是由馬傳染性貧血病毒（EIAV）引起的一種慢性或急性傳染病，主要通過(guò)吸血昆蟲(chóng)傳播，對(duì)馬屬動(dòng)物危害極大。該病以發(fā)熱、貧血、消瘦及免疫抑制為特征，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為須通報(bào)的疫病之一。間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（間接ELISA）作為一種高靈敏度、高特異性的血清學(xué)檢測(cè)方法，已成為實(shí)驗(yàn)室診斷EIA的核心技術(shù)。其原理是通過(guò)病毒抗原包被反應(yīng)板，捕獲血清中的特異性抗體，再結(jié)合酶標(biāo)二抗進(jìn)行信號(hào)放大，最終通過(guò)顯色反應(yīng)判定抗體存在與否，為疫病防控提供科學(xué)依據(jù)。

檢測(cè)項(xiàng)目與核心指標(biāo)

間接ELISA檢測(cè)的核心目標(biāo)是檢測(cè)馬血清中針對(duì)EIAV的特異性抗體。檢測(cè)項(xiàng)目包括：
1. 抗體定性檢測(cè)：判斷樣本中是否存在EIAV抗體；
2. 抗體效價(jià)分析（需定量試劑盒）：評(píng)估抗體濃度水平；
3. 交叉反應(yīng)排除：通過(guò)特異性對(duì)照排除其他病毒抗體的干擾。

檢測(cè)儀器與設(shè)備

開(kāi)展間接ELISA檢測(cè)需配備以下核心儀器：
- 酶標(biāo)儀：用于讀取450nm波長(zhǎng)下的吸光度值（OD值）；
- 洗板機(jī)：確保反應(yīng)板洗脫的標(biāo)準(zhǔn)化操作；
- 恒溫孵育箱：維持37℃恒溫環(huán)境以完成抗原-抗體結(jié)合；
- 微量移液器：精確加樣（范圍1-1000μL）；
- 振蕩器：用于反應(yīng)溶液的混合均勻。

檢測(cè)方法與操作流程

間接ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)流程分為以下步驟：
1. 抗原包被：將純化的EIAV抗原包被于96孔板，4℃過(guò)夜；
2. 封閉處理：加入5%脫脂牛奶封閉非特異性位點(diǎn)；
3. 血清孵育：加入待檢血清（稀釋比例通常為1:100），37℃孵育1小時(shí)；
4. 二抗結(jié)合：加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗馬IgG二抗；
5. 顯色反應(yīng)：TMB底物顯色，2M硫酸終止反應(yīng)；
6. 結(jié)果判讀：通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，計(jì)算臨界值（Cut-off值），判定陽(yáng)性/陰性。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量控制

檢測(cè)過(guò)程需嚴(yán)格遵守以下國(guó)際及國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：
- OIE標(biāo)準(zhǔn)：《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)》中的EIA診斷指南；
- 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：GB/T XXXX《馬傳染性貧血診斷技術(shù)》；
- 質(zhì)量控制要求：每批次實(shí)驗(yàn)需包含陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照及空白對(duì)照，OD值需滿足陽(yáng)性對(duì)照/陰性對(duì)照（P/N）≥2.1，且陰性對(duì)照OD值≤0.3。

注意事項(xiàng)與局限性

間接ELISA檢測(cè)需注意：
1. 避免反復(fù)凍融血清樣本，防止抗體效價(jià)下降；
2. 嚴(yán)格校準(zhǔn)酶標(biāo)儀，確保吸光度值準(zhǔn)確性；
3. 對(duì)弱陽(yáng)性樣本需結(jié)合瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）復(fù)核；
4. 疫苗接種后可能出現(xiàn)短暫抗體陽(yáng)性，需結(jié)合臨床病史綜合判斷。