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鹿流行性出血病檢疫技術(shù)規(guī)范檢測

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發(fā)布時間：2025-05-14 02:58:43 更新時間：2025-05-13 21:43:41

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

鹿流行性出血病檢疫技術(shù)規(guī)范檢測

鹿流行性出血?。‥pizootic Hemorrhagic Disease, EHD）是由鹿流行性出血病病毒（EHDV）引起的一種急性、高致死性傳染病，主要感染鹿科動物，通過蠓類媒介傳播。該病具有突發(fā)性強、傳播速度快的特點，對野生動物保護(hù)和養(yǎng)殖業(yè)構(gòu)成嚴(yán)重威脅。規(guī)范化的檢疫技術(shù)是早期發(fā)現(xiàn)、精準(zhǔn)診斷和有效防控的核心手段。本文圍繞檢測項目、檢測儀器、檢測方法及檢測標(biāo)準(zhǔn)四大核心內(nèi)容，系統(tǒng)闡述鹿流行性出血病檢疫的技術(shù)規(guī)范。

一、檢測項目

鹿流行性出血病的檢測項目主要包括以下幾類：
1. 病原學(xué)檢測：直接檢測病毒顆粒或核酸，包括病毒分離培養(yǎng)、RT-PCR檢測等；
2. 血清學(xué)檢測：通過ELISA、病毒中和試驗（VNT）等方法檢測抗體；
3. 病理學(xué)檢測：觀察組織病變特征，如出血、水腫等；
4. 分子生物學(xué)檢測：針對病毒基因組的特異性片段進(jìn)行測序分析。

二、檢測儀器

檢測過程中需使用以下關(guān)鍵儀器設(shè)備：
1. PCR儀：用于病毒核酸擴增；
2. 酶標(biāo)儀：ELISA試驗中讀取吸光度值；
3. 細(xì)胞培養(yǎng)箱：病毒分離所需的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境；
4. 生物安全柜：保障病毒操作的安全性；
5. 顯微鏡：觀察病理切片及細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）。

三、檢測方法

1. 病毒分離：采集血液或脾臟樣本接種于敏感細(xì)胞系（如BHK-21），觀察CPE并進(jìn)行免疫熒光鑒定；
2. RT-PCR：針對EHDV的VP7或VP2基因設(shè)計引物，通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)擴增病毒RNA；
3. 競爭ELISA：使用重組蛋白作為包被抗原，檢測血清中的特異性抗體；
4. 實時熒光定量PCR：定量分析病毒載量，評估感染程度。

四、檢測標(biāo)準(zhǔn)

檢測流程需嚴(yán)格遵循以下標(biāo)準(zhǔn)：
1. 國際標(biāo)準(zhǔn)：參考OIE《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》中EHDV檢測指南；
2. 國家標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)《動物疫病診斷技術(shù)規(guī)范》（GB/T 標(biāo)準(zhǔn)號）中的技術(shù)要求；
3. 生物安全規(guī)范：病毒分離和核酸提取需在BSL-2實驗室進(jìn)行；
4. 質(zhì)量控制：每批次實驗需設(shè)置陰性對照、陽性對照和空白對照。

通過上述規(guī)范化的檢測技術(shù)體系，可實現(xiàn)對鹿流行性出血病的快速確診和精準(zhǔn)防控，為疫病監(jiān)測與凈化提供科學(xué)依據(jù)。