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食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-05-14 03:05:07 更新時(shí)間：2025-05-13 21:43:42

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)檢測(cè)

食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)中的志賀氏菌檢測(cè)

在食品衛(wèi)生安全領(lǐng)域，志賀氏菌（Shigella）的檢測(cè)是保障消費(fèi)者健康的重要環(huán)節(jié)。志賀氏菌是引起細(xì)菌性痢疾的主要病原體之一，可通過(guò)污染食品或水源傳播，導(dǎo)致發(fā)熱、腹瀉、腹痛等癥狀，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命。由于其在食品中的存在具有潛在高風(fēng)險(xiǎn)性，各國(guó)食品安全標(biāo)準(zhǔn)均將其列為重點(diǎn)監(jiān)測(cè)對(duì)象。通過(guò)科學(xué)的微生物學(xué)檢驗(yàn)方法，能夠有效識(shí)別食品中志賀氏菌的污染情況，預(yù)防食源性疾病暴發(fā)。

檢測(cè)項(xiàng)目與范圍

志賀氏菌的檢測(cè)主要包括以下核心項(xiàng)目：
1. 菌落總數(shù)測(cè)定：通過(guò)選擇性培養(yǎng)基分離目標(biāo)菌落；
2. 生化特性鑒定：利用糖發(fā)酵、氧化酶試驗(yàn)等確認(rèn)菌種特性；
3. 血清學(xué)分型：區(qū)分志賀氏菌的4種血清群（A-D群）；
4. 毒力基因檢測(cè)：通過(guò)分子生物學(xué)方法驗(yàn)證毒力因子（如ipaH基因）。
檢測(cè)范圍涵蓋生鮮食品、即食食品、乳制品及飲用水等，尤其需關(guān)注高風(fēng)險(xiǎn)食品的加工和儲(chǔ)存環(huán)節(jié)。

檢測(cè)儀器與設(shè)備

完成志賀氏菌檢驗(yàn)需依賴(lài)專(zhuān)業(yè)儀器，主要包括：
- 微生物培養(yǎng)箱（溫度控制精度±0.5℃）
- PCR儀（用于毒力基因擴(kuò)增）
- 全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)（如VITEK 2 Compact）
- 生物安全柜（二級(jí)以上防護(hù)）
- 熒光顯微鏡（觀察菌株形態(tài)）
- 高壓滅菌鍋（121℃滅菌處理）

檢測(cè)方法與流程

檢測(cè)流程遵循“預(yù)增菌→選擇性增菌→分離培養(yǎng)→生化鑒定→血清學(xué)確認(rèn)”的標(biāo)準(zhǔn)步驟：
1. 樣品前處理：25g樣品加入225mL志賀氏菌增菌液（GN肉湯），36℃培養(yǎng)24小時(shí)；
2. 選擇性培養(yǎng)：轉(zhuǎn)種至XLD瓊脂和HE瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)；
3. 可疑菌落篩選：挑取無(wú)色透明（XLD）或藍(lán)綠色（HE）菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)；
4. 生化試驗(yàn)：采用API 20E或微量生化管進(jìn)行系統(tǒng)鑒定；
5. 分子檢測(cè)：通過(guò)PCR檢測(cè)ipaH基因（引物序列：5'-GTTCCCTTGACCGCCTTTCCGAT-3'和5'-GCCGGTCAGCCACCCTCTGAG-3'）。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范

國(guó)內(nèi)外主要參考標(biāo)準(zhǔn)包括：
- 中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：GB 4789.5-2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)》
- 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)：ISO 21567-2004《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué) 志賀氏菌檢測(cè)水平法》
- FDA方法：BAM Chapter 6《Shigella》
檢測(cè)結(jié)果判定需滿足：生化反應(yīng)符合志賀氏菌特征，且血清凝集試驗(yàn)陽(yáng)性或PCR檢測(cè)到特異性基因。

質(zhì)量控制要點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期使用標(biāo)準(zhǔn)菌株（如ATCC 12022）進(jìn)行質(zhì)控，確保：
- 培養(yǎng)基靈敏度≥80%
- 選擇性培養(yǎng)基抑制率≤50%
- PCR檢測(cè)限達(dá)到10^2 CFU/g
檢測(cè)過(guò)程中需嚴(yán)格遵循生物安全三級(jí)防護(hù)要求，防止實(shí)驗(yàn)室污染。