雞傳染性喉氣管炎瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)概述
雞傳染性喉氣管炎（Infectious Laryngotracheitis, ILT）是由皰疹病毒引起的一種急性、高度接觸性呼吸道傳染病，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。該病以呼吸困難、咳嗽、咳血及高死亡率為特征，快速準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室診斷對(duì)防控至關(guān)重要。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（Agar Gel Immunodiffusion, AGID）作為一種經(jīng)典的血清學(xué)檢測(cè)方法，因其操作簡便、成本低廉且特異性較高，被廣泛用于ILT抗體的篩查和疫情監(jiān)測(cè)。
瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)基于抗原抗體在瓊脂凝膠中自由擴(kuò)散并形成可見沉淀線的原理，通過檢測(cè)血清樣本中特異性抗體的存在，間接判斷雞群是否感染或接觸過ILT病毒。該方法適用于規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)、實(shí)驗(yàn)室及基層獸醫(yī)站的初步診斷，尤其對(duì)未接種疫苗的雞群具有較高的應(yīng)用價(jià)值。
檢測(cè)項(xiàng)目
本試驗(yàn)主要針對(duì)以下檢測(cè)目標(biāo)：
1. ILT病毒特異性抗體檢測(cè)：評(píng)估雞群免疫狀態(tài)或自然感染后的抗體水平。
2. 抗原鑒定：通過標(biāo)準(zhǔn)陽性血清驗(yàn)證疑似樣本中ILT病毒抗原的存在。
3. 疫情溯源分析：結(jié)合流行病學(xué)數(shù)據(jù)，追溯感染源頭。
檢測(cè)儀器與試劑
實(shí)驗(yàn)所需核心設(shè)備及材料包括：
- 精密pH計(jì)（校準(zhǔn)瓊脂緩沖液pH值至7.2-7.4）
- 水平瓊脂板制備平臺(tái)（確保瓊脂厚度均勻）
- 恒溫培養(yǎng)箱（37℃±1℃）
- 瓊脂糖（純度≥98%）
- ILT標(biāo)準(zhǔn)抗原及陽性對(duì)照血清
- 打孔器（孔徑3mm，間距5mm）
- 微量移液器（10μL精度）
檢測(cè)方法步驟
1. 瓊脂板制備：將1.2%瓊脂糖與PBS緩沖液混合，加熱溶解后注入平皿形成3mm厚凝膠層。
2. 打孔排列：采用中心孔+周邊孔模式，中心孔加入標(biāo)準(zhǔn)抗原，周邊孔依次加入待測(cè)血清及陰陽性對(duì)照。
3. 擴(kuò)散反應(yīng)：將瓊脂板置于濕盒中，37℃孵育24-48小時(shí)，觀察沉淀線形成情況。
4. 結(jié)果判讀：待測(cè)樣本與中心抗原間出現(xiàn)清晰沉淀線且與陽性對(duì)照吻合，判為陽性；無沉淀線則為陰性。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量控制
本試驗(yàn)嚴(yán)格遵循以下標(biāo)準(zhǔn)體系：
- OIE陸生動(dòng)物診斷手冊(cè)（第2023版）中ILT診斷規(guī)范
- GB/T 22332-2008 禽傳染性喉氣管炎診斷技術(shù)
- SN/T 1222-2015 禽傳染性喉氣管炎瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)方法
質(zhì)量控制要求：
- 每批次試驗(yàn)必須包含陽性對(duì)照和陰性對(duì)照
- 沉淀線需在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定顯現(xiàn)且清晰可辨
- 試驗(yàn)環(huán)境溫度波動(dòng)不超過±1℃
- 試劑儲(chǔ)存條件符合2-8℃冷鏈要求
注意事項(xiàng)
1. 樣本需為新鮮分離血清，避免溶血或反復(fù)凍融
2. 抗原與抗體比例需通過預(yù)試驗(yàn)優(yōu)化調(diào)整
3. 瓊脂板應(yīng)避光保存防止脫水失效
4. 弱陽性結(jié)果需結(jié)合PCR或病毒分離進(jìn)行確認(rèn)
5. 實(shí)驗(yàn)廢棄物需經(jīng)121℃高壓滅菌處理
CMA認(rèn)證
檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書
證書編號(hào)：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認(rèn)可
實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書
證書編號(hào)：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認(rèn)證
質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書
證書編號(hào)：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
掃一掃，更多精彩