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最小抑菌濃度測(cè)定試驗(yàn)-營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋法檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-05-15 11:13:53 更新時(shí)間：2025-05-14 11:13:54

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

最小抑菌濃度測(cè)定試驗(yàn)-營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋法檢測(cè)

最小抑菌濃度測(cè)定試驗(yàn)-營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋法檢測(cè)概述

最小抑菌濃度（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）是評(píng)價(jià)抗菌藥物對(duì)微生物抑制效果的關(guān)鍵指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于臨床藥敏試驗(yàn)、新藥研發(fā)及抗菌機(jī)制研究等領(lǐng)域。營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋法作為MIC測(cè)定的經(jīng)典方法之一，通過(guò)將抗菌藥物在液體培養(yǎng)基中梯度稀釋并與目標(biāo)菌株共培養(yǎng)，最終確定抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度。該方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果直觀，且符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化要求，適用于需氧菌、厭氧菌及真菌的MIC測(cè)定。

檢測(cè)項(xiàng)目

本試驗(yàn)的核心檢測(cè)項(xiàng)目包括：
1. 目標(biāo)微生物（如細(xì)菌或真菌）對(duì)不同抗菌藥物的敏感性；
2. 抗菌藥物的體外抑菌效力分級(jí)（敏感、中介、耐藥）；
3. 藥物濃度梯度對(duì)微生物生長(zhǎng)的抑制作用曲線。

檢測(cè)儀器與材料

實(shí)驗(yàn)所需主要儀器和材料包括：
1. 微量稀釋板：用于梯度稀釋抗菌藥物的96孔板；
2. 分光光度計(jì)或濁度儀：測(cè)定菌液濃度，確保接種菌量標(biāo)準(zhǔn)化（通常0.5麥?zhǔn)蠞岫龋?br> 3. 恒溫培養(yǎng)箱：提供適宜微生物生長(zhǎng)的溫度環(huán)境（如35±2℃）；
4. 無(wú)菌移液器及吸頭：精確轉(zhuǎn)移藥液和菌液；
5. 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（如Mueller-Hinton Broth）及待測(cè)抗菌藥物原液。

檢測(cè)方法

實(shí)驗(yàn)步驟如下：
1. 藥物稀釋：將抗菌藥物用肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行倍比稀釋（如256 μg/mL至0.125 μg/mL），加入微量板各孔；
2. 菌液制備：挑取純培養(yǎng)菌落配制標(biāo)準(zhǔn)濃度菌懸液（通常1×10⁶ CFU/mL）；
3. 接種與培養(yǎng)：每孔加入定量菌液，混勻后置于恒溫箱培養(yǎng)16-24小時(shí)；
4. 結(jié)果判讀：肉眼或酶標(biāo)儀觀察孔內(nèi)濁度變化，無(wú)可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低藥物濃度即為MIC值。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量控制

為確保結(jié)果可靠性，需遵循以下標(biāo)準(zhǔn)：
1. CLSI指南（Clinical and Laboratory Standards Institute）：根據(jù)M07系列文件規(guī)范操作流程；
2. EUCAST標(biāo)準(zhǔn)（European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing）：明確不同菌種的折點(diǎn)判定標(biāo)準(zhǔn)；
3. 質(zhì)控菌株驗(yàn)證：使用ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株（如大腸埃希菌ATCC 25922）進(jìn)行平行試驗(yàn)；
4. 重復(fù)性要求：同一藥物-菌株組合需重復(fù)測(cè)定3次，結(jié)果偏差不超過(guò)1個(gè)稀釋度。

營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋法通過(guò)嚴(yán)格的操作流程和標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)控，能夠?yàn)榕R床合理用藥和新藥評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)，是微生物藥敏試驗(yàn)的基石方法之一。