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ZEIN內源基因檢測

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發(fā)布時間：2025-05-15 18:21:45 更新時間：2025-05-14 18:21:46

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作者：中科光析科學技術研究所檢測中心

ZEIN內源基因檢測的概述

ZEIN是玉米（Zea mays）中主要的貯藏蛋白，其編碼基因屬于玉米內源基因的重要組成部分。在農業(yè)生物技術、食品安全檢測及轉基因作物監(jiān)管領域，ZEIN內源基因檢測具有關鍵作用。由于ZEIN基因僅存在于玉米基因組中，且表達具有高度特異性，它常被用作轉基因玉米檢測的內參基因，以確保檢測結果的準確性和可靠性。通過分析ZEIN基因的存在與否，可驗證樣品中是否含有玉米成分，同時排除其他作物或污染物的干擾。此外，在轉基因玉米的定量檢測中，ZEIN基因的拷貝數常作為標準化指標，用于計算外源基因的插入比例。

檢測項目

ZEIN內源基因檢測的核心項目包括：1）玉米內源基因特異性鑒定，確認樣品中是否含有玉米DNA；2）轉基因玉米事件篩查，通過ZEIN基因作為內參判斷外源基因的存在；3）定量分析中玉米成分的標準化校準；4）食品及飼料中玉米源性成分的溯源檢測。這些項目廣泛應用于海關檢疫、食品安全監(jiān)測、種子質量控制和科研實驗等領域。

檢測儀器

主要檢測設備包括：實時熒光定量PCR儀（如ABI 7500）、核酸提取儀（如MagMAX系統(tǒng)）、凝膠成像系統(tǒng)（如Bio-Rad Gel Doc XR+）、微量分光光度計（如NanoDrop）以及電泳系統(tǒng)。其中實時熒光定量PCR儀是核心設備，可同時完成ZEIN基因的定性和定量分析，其靈敏度可達0.1%的玉米成分檢出。

檢測方法

標準檢測流程包含：1）CTAB法或商業(yè)化試劑盒提取樣本DNA；2）設計ZEIN基因特異性引物和探針（如引物序列ZEIN-F:5'-CGATCTTGCCAGTCAAGTCC-3'，ZEIN-R:5'-TGGTGGCATCCACATCTTTC-3'）；3）采用SYBR Green或TaqMan探針法進行實時熒光定量PCR；4）通過熔解曲線分析和標準曲線建立確認結果。檢測需設置陽性對照（玉米標準品）和陰性對照（非玉米樣本），同時監(jiān)測內參基因擴增效率（90%-110%為有效范圍）。

檢測標準

國內外主要參考標準包括：1）國家標準GB/T 19495.5-2018《轉基因產品檢測玉米內標準基因定性PCR方法》；2）ISO 21569:2005《食品檢測-轉基因生物分析方法》；3）農業(yè)部2031號公告-19-2013《轉基因植物及其產品成分檢測玉米內標準基因定性PCR方法》。檢測中要求ZEIN基因擴增產物長度約為128bp，熔解溫度（Tm值）應在84±1℃范圍內，定量檢測時標準曲線的相關系數（R2）需≥0.99。