您現(xiàn)在的位置：首頁(yè) > 檢測(cè)項(xiàng)目 > 其他檢測(cè)

tNOS終止子檢測(cè)

1對(duì)1客服專屬服務(wù)，免費(fèi)制定檢測(cè)方案，15分鐘極速響應(yīng)

可選形式：電子報(bào)告紙質(zhì)報(bào)告

可選語(yǔ)言：中文報(bào)告英文報(bào)告

發(fā)布時(shí)間：2025-05-15 18:59:03 更新時(shí)間：2025-05-14 18:59:04

點(diǎn)擊：0

作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

NOS終止子檢測(cè)概述

NOS終止子（Nopaline Synthase Terminator）是轉(zhuǎn)基因生物中廣泛使用的一種調(diào)控元件，常用于終止基因表達(dá)信號(hào)。隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的快速發(fā)展，NOS終止子的檢測(cè)成為食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)及生物技術(shù)產(chǎn)品監(jiān)管的重要環(huán)節(jié)。其檢測(cè)目標(biāo)主要包括驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因作物中外源基因的完整性、評(píng)估基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)的功能性，以及確保轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品符合國(guó)際和國(guó)內(nèi)生物安全法規(guī)要求。通過科學(xué)規(guī)范的檢測(cè)流程，可有效識(shí)別樣本中是否含有NOS終止子序列，從而為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的溯源、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和標(biāo)識(shí)管理提供關(guān)鍵技術(shù)支撐。

檢測(cè)項(xiàng)目

NOS終止子檢測(cè)的核心項(xiàng)目包括：
1. DNA提取與純度檢測(cè)：確保樣本中基因組DNA的完整性和濃度滿足后續(xù)分析需求；
2. 終止子特異性序列檢測(cè)：通過靶向擴(kuò)增驗(yàn)證NOS終止子的存在；
3. 定量分析（適用于定量檢測(cè)需求）：測(cè)定終止子在樣品中的相對(duì)或絕對(duì)含量；
4. 交叉污染排查：排除實(shí)驗(yàn)過程中可能引入的假陽(yáng)性干擾。

檢測(cè)儀器

檢測(cè)過程中需使用以下關(guān)鍵儀器：
- PCR擴(kuò)增儀：用于特異性引物擴(kuò)增目標(biāo)序列；
- 電泳系統(tǒng)（瓊脂糖凝膠電泳或毛細(xì)管電泳）：分析擴(kuò)增產(chǎn)物片段大??；
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（qPCR）：實(shí)現(xiàn)高靈敏度的定量檢測(cè)；
- 核酸濃度檢測(cè)儀（如分光光度計(jì)或熒光計(jì)）：評(píng)估DNA提取質(zhì)量；
- 測(cè)序儀（適用于結(jié)果驗(yàn)證）：確認(rèn)擴(kuò)增產(chǎn)物的序列準(zhǔn)確性。

檢測(cè)方法

常規(guī)檢測(cè)流程涵蓋以下方法：
1. CTAB法或試劑盒法提取DNA：從樣品中分離高質(zhì)量基因組DNA；
2. PCR擴(kuò)增：使用特異性引物（如Nos-F: 5'-GATTGAATCCTGTTGCCGGT-3'，Nos-R: 5'-TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'）進(jìn)行靶向擴(kuò)增，反應(yīng)條件通常為94℃預(yù)變性5分鐘，隨后35個(gè)循環(huán)（94℃ 30秒，55℃ 30秒，72℃ 30秒），最后72℃延伸5分鐘；
3. 電泳分析：通過1.5%瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)擴(kuò)增產(chǎn)物是否為預(yù)期的195 bp片段；
4. 測(cè)序驗(yàn)證：對(duì)陽(yáng)性樣本進(jìn)行雙向測(cè)序，與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的NOS終止子標(biāo)準(zhǔn)序列（GenBank: V00087）比對(duì)。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

NOS終止子檢測(cè)需遵循以下國(guó)際及國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)：
- ISO 21569:2005《分子生物學(xué)分析方法驗(yàn)證指南》；
- GB/T 19495.5-2018《轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 核酸定量PCR方法》；
- SN/T 1196-2020《植物及其產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè) 實(shí)時(shí)熒光PCR法》；
- OECD Guideline for Testing of Chemicals No. 487：針對(duì)轉(zhuǎn)基因生物分子特征的驗(yàn)證要求。實(shí)驗(yàn)室需通過質(zhì)控樣品（含已知NOS終止子的陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照）確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。