PCR及酵母菌檢測
本檢測項目采用聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）技術(shù)，針對臨床樣本（如血液、痰液、腦脊液、組織、分泌物、尿液等）或特定樣本（如食品、環(huán)境拭子）中是否存在酵母菌（Yeast）的DNA進行特異性擴增和檢測。
檢測目的
主要用于快速、靈敏、特異地診斷酵母菌感染（如念珠菌病、隱球菌病等），或檢測特定樣本中是否含有酵母菌污染。相比傳統(tǒng)培養(yǎng)方法，PCR檢測具有耗時短、靈敏度高、不受前期抗生素使用影響等優(yōu)點，尤其適用于難以培養(yǎng)或生長緩慢的酵母菌診斷，以及早期或深部感染的輔助診斷。
檢測原理
基于聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）原理：
- 核酸提?。?/strong> 從樣本中提取總DNA（包含潛在的酵母菌DNA）。
- PCR擴增： 使用針對酵母菌高度保守的特異性基因片段（如18S rRNA基因、ITS區(qū)域、或特定種屬基因如念珠菌的CaERG11、隱球菌的CNLAC1）設(shè)計的引物進行擴增。該步驟在熱循環(huán)儀中完成，經(jīng)過變性、退火、延伸多個循環(huán)，將目標DNA片段指數(shù)級擴增。
- 檢測與分析： 通過瓊脂糖凝膠電泳結(jié)合溴化乙錠（或其他熒光染料）染色觀察擴增產(chǎn)物條帶，或采用實時熒光定量PCR（qPCR）在擴增過程中實時監(jiān)測熒光信號，判斷目標DNA是否存在及其相對含量（qPCR）。部分方法可設(shè)計種屬特異性的引物或探針進行多重PCR或測序分析，以區(qū)分不同的酵母菌種屬（如區(qū)分白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、新型隱球菌/格特隱球菌等）。
樣本要求
- 臨床樣本： 無菌采集的血液（EDTA抗凝管或血培養(yǎng)瓶）、腦脊液（無菌管）、無菌體液、組織（無菌容器）、肺泡灌洗液（無菌容器）、痰液（清潔口腔后深咳，無菌容器）、生殖道分泌物（無菌拭子）、尿液（清潔中段尿，無菌容器）等。具體樣本類型和采集量請遵循醫(yī)囑或?qū)嶒炇乙蟆?/li>
- 非臨床樣本： 如食品、環(huán)境拭子等，需按相關(guān)規(guī)范進行無菌采集和處理。
- 運輸與保存： 采集后應(yīng)盡快（通常在2-4小時內(nèi)）送檢。若不能及時送檢，需按實驗室要求冷藏（2-8°C）或冷凍（-20°C或更低）保存。避免反復(fù)凍融。
報告解讀
- 陽性結(jié)果： 表示在樣本中檢測到了目標酵母菌的特異性DNA片段。提示存在該酵母菌的感染或定植/污染。陽性結(jié)果需結(jié)合患者的臨床癥狀、體征、其他實驗室檢查（如培養(yǎng)、G試驗、GM試驗、影像學(xué)）及流行病學(xué)史進行綜合判斷。qPCR結(jié)果可提供半定量信息（如Ct值），但解讀需謹慎，Ct值與真菌載量、感染嚴重程度的相關(guān)性因方法、樣本類型和病原體而異。
- 陰性結(jié)果： 表示在本次檢測中未檢測到目標酵母菌的特異性DNA片段。但陰性結(jié)果不能完全排除感染，尤其是在樣本中病原體載量過低、樣本采集不當、送檢延誤、存在PCR抑制物或引物探針不匹配特定罕見菌株時。
- 種屬鑒定結(jié)果： 若檢測包含種屬鑒定，報告會明確指明檢出的酵母菌種屬（如“檢出白色念珠菌DNA”、“檢出新型隱球菌DNA”）。這對于指導(dǎo)抗真菌藥物的精準選擇（如氟康唑?qū)饣钪榫?、克柔念珠菌效果差，隱球菌首選兩性霉素B+5FC）具有重要意義。
注意事項
- PCR檢測靈敏度高，但對實驗操作環(huán)境（防止氣溶膠污染）和操作規(guī)范性（防止樣本間交叉污染）要求嚴格，假陽性和假陰性均可能發(fā)生。
- 檢測結(jié)果僅針對引物/探針設(shè)計所針對的特定酵母菌種屬。未涵蓋的種屬或新出現(xiàn)的菌株可能無法檢出。
- 陽性結(jié)果需區(qū)分是感染、定植還是污染，特別是來自非無菌部位（如痰液、生殖道）的樣本。
- 陰性結(jié)果不能排除感染。
- 本檢測是輔助診斷工具，臨床決策應(yīng)結(jié)合患者的整體情況。
CMA認證
檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認可
實驗室認可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認證
質(zhì)量管理體系認證證書
證書編號：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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