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馬鼻疽ELISA檢測檢測

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發(fā)布時間：2025-05-14 06:05:32 更新時間：2025-05-13 06:05:32

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

馬鼻疽ELISA檢測概述

馬鼻疽（Glanders）是一種由鼻疽伯克霍爾德氏菌（Burkholderia mallei）引起的人畜共患傳染病，主要感染馬、騾、驢等單蹄動物，也可通過接觸傳播給人類。該病被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須通報的疫病之一，對畜牧業(yè)和公共衛(wèi)生安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅。ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）作為一種高靈敏度、高特異性的血清學(xué)檢測方法，被廣泛應(yīng)用于馬鼻疽的早期篩查、疫情監(jiān)測和防控工作中。相較于傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)和補(bǔ)體結(jié)合試驗（CFT），ELISA具有操作簡便、高通量、結(jié)果客觀等優(yōu)勢，尤其適用于大規(guī)模樣本的快速檢測。

檢測項目

馬鼻疽ELISA檢測的核心項目是檢測動物血清中針對鼻疽伯克霍爾德氏菌的特異性抗體。檢測樣本通常為采集自馬屬動物的全血經(jīng)離心分離后的血清。根據(jù)檢測目的不同，可細(xì)分為定性檢測（判斷抗體存在與否）和定量檢測（測定抗體滴度）。此外，部分實驗室會結(jié)合其他檢測方法（如PCR）進(jìn)行復(fù)核，以提高診斷準(zhǔn)確性。

檢測儀器

ELISA檢測需配備專業(yè)儀器設(shè)備，主要包括：
1. 酶標(biāo)儀：用于讀取反應(yīng)板的吸光度值（OD值），推薦使用可調(diào)節(jié)波長的多通道儀器；
2. 洗板機(jī)：確保反應(yīng)孔洗滌的均一性和徹底性；
3. 恒溫孵育箱：控制反應(yīng)溫度（通常為37℃）；
4. 微量移液器及多通道移液槍：精確加樣；
5. 生物安全柜：保障樣本處理和試劑操作的安全性。

檢測方法

間接ELISA是馬鼻疽檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法，具體流程如下：
1. 包被：將純化的鼻疽伯克霍爾德氏菌抗原固定在酶標(biāo)板孔內(nèi)；
2. 封閉：用牛血清白蛋白（BSA）封閉非特異性結(jié)合位點；
3. 加樣：加入稀釋后的待測血清和陰陽性對照；
4. 孵育：37℃孵育使抗體與抗原結(jié)合；
5. 洗滌：去除未結(jié)合的游離抗體；
6. 加酶標(biāo)二抗：加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗馬IgG抗體；
7. 顯色：加入TMB底物溶液進(jìn)行顯色反應(yīng)；
8. 終止與讀數(shù)：用終止液終止反應(yīng)后，測定450nm處的吸光值。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

馬鼻疽ELISA檢測需遵循國際和國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)：
1. OIE《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》第3.5.6章規(guī)定；
2. GB/T 14926.50-2001《實驗動物鼻疽抗體檢測方法》；
3. 試劑盒需通過靈敏度（≥95%）和特異性（≥98%）驗證；
4. 陰陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：樣本OD值/陰性對照OD值（S/P值）≥0.4判為陽性；
5. 實驗室需定期參加能力驗證（PT）并建立內(nèi)部質(zhì)量控制體系。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，部分實驗室開始采用重組抗原或單克隆抗體改進(jìn)ELISA方法，以提高檢測效率。但無論技術(shù)如何迭代，嚴(yán)格的生物安全防護(hù)和規(guī)范化的操作流程始終是保障檢測結(jié)果可靠性的核心要素。