遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)檢測(cè)

遲發(fā)型超敏反應(yīng)（Delayed-Type Hypersensitivity, DTH）是機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)特定抗原（如微生物、化學(xué)物質(zhì)或移植抗原）產(chǎn)生的一種以T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)為主的炎癥反應(yīng)，其特征是反應(yīng)發(fā)生較遲緩（通常在再次接觸抗原24-72小時(shí)后達(dá)到高峰）。DTH試驗(yàn)在臨床醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)研究和安全性評(píng)價(jià)（如藥物、醫(yī)療器械、化妝品的生物相容性）中具有重要意義。它常用于評(píng)估個(gè)體的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)（如免疫缺陷或免疫抑制）、輔助診斷某些感染性疾病（如結(jié)核）、檢測(cè)藥物或化學(xué)物質(zhì)的潛在致敏性以及監(jiān)測(cè)移植排斥反應(yīng)。該試驗(yàn)通過(guò)在受試者皮膚內(nèi)或皮內(nèi)注射或貼敷特定抗原，觀察局部產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)（紅斑、硬結(jié)）的強(qiáng)度和發(fā)生時(shí)間，從而判斷是否存在針對(duì)該抗原的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答。

檢測(cè)項(xiàng)目

遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)的核心檢測(cè)項(xiàng)目是評(píng)估受試者皮膚對(duì)特定抗原刺激產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)強(qiáng)度。具體觀察和測(cè)量的指標(biāo)通常包括：

• 紅斑 (Erythema): 注射或貼敷部位皮膚發(fā)紅的范圍、顏色深度。
• 硬結(jié) (Induration): 注射或貼敷部位皮膚及皮下組織的腫脹、硬化程度，這是DTH反應(yīng)更特異的標(biāo)志。
• 水腫 (Edema): 局部腫脹的程度。
• 反應(yīng)直徑 (Reaction Diameter): 紅斑和/或硬結(jié)的最大直徑以及垂直直徑（或計(jì)算平均直徑）。
• 反應(yīng)強(qiáng)度評(píng)分 (Reaction Intensity Score): 根據(jù)紅斑、硬結(jié)的大小、形態(tài)等特征進(jìn)行半定量評(píng)分（如0-4+級(jí)）。
• 反應(yīng)發(fā)生時(shí)間 (Time of Onset): 首次觀察到明顯反應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)。
• 反應(yīng)高峰時(shí)間 (Peak Reaction Time): 反應(yīng)達(dá)到最嚴(yán)重程度的時(shí)間點(diǎn)（通常在48-72小時(shí)）。

常見(jiàn)的具體DTH試驗(yàn)項(xiàng)目包括：結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)（PPD試驗(yàn)）、念珠菌抗原試驗(yàn)、破傷風(fēng)類毒素試驗(yàn)、鎳斑貼試驗(yàn)等。

檢測(cè)儀器

遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)主要依賴人工觀察和簡(jiǎn)單的測(cè)量工具，但在特定研究或標(biāo)準(zhǔn)化評(píng)價(jià)中也會(huì)使用更精密的儀器：

• 皮試注射器/針頭 (Intradermal Syringe/Needle): 用于精確進(jìn)行皮內(nèi)注射抗原（如結(jié)核菌素試驗(yàn)）。
• 斑貼試驗(yàn)室/斑試器 (Patch Test Chambers): 用于貼敷變應(yīng)原（如接觸性皮炎檢測(cè)）。
• 游標(biāo)卡尺 (Vernier Caliper) 或 專用皮膚反應(yīng)尺 (Skin Reaction Gauge): 最常用、最核心的工具，用于精確測(cè)量紅斑或硬結(jié)的直徑（毫米mm）。
• 測(cè)量透明尺/網(wǎng)格紙 (Transparent Ruler/Grid Paper): 輔助測(cè)量反應(yīng)范圍。
• 皮膚測(cè)厚儀 (Skin Fold Caliper): 有時(shí)用于定量測(cè)量硬結(jié)的厚度。
• 皮膚色度計(jì)/紅斑儀 (Chromameter/Erythema Meter): 通過(guò)測(cè)量皮膚反射光來(lái)客觀定量紅斑的程度（尤其用于研究或標(biāo)準(zhǔn)化評(píng)價(jià)）。
• 數(shù)碼相機(jī) (Digital Camera): 用于記錄反應(yīng)部位的影像，輔助評(píng)估和存檔。

檢測(cè)方法

遲發(fā)型超敏反應(yīng)的檢測(cè)方法主要分為體內(nèi)試驗(yàn)（最常用）和體外試驗(yàn)：

• 1. 體內(nèi)試驗(yàn)（皮膚試驗(yàn) - Skin Testing）:
  • 皮內(nèi)注射法 (Intradermal Injection): 使用細(xì)針頭將少量（通常0.1ml）抗原溶液注入受試者前臂掌側(cè)或背部的真皮層內(nèi)，形成一個(gè)小皮丘（如PPD試驗(yàn)）。
  • 斑貼試驗(yàn)法 (Patch Test): 將含有可疑變應(yīng)原的斑試器貼敷于受試者背部或上臂外側(cè)無(wú)損傷的皮膚上，通常保留48小時(shí)（如檢測(cè)接觸性過(guò)敏）。
  • 多點(diǎn)穿刺法 (Multi-Test Devices): 使用特制的帶多個(gè)針頭的裝置，同時(shí)將多種抗原刺入皮膚表皮層（如CMI Multi-test）。
• 2. 體外試驗(yàn) (In Vitro Testing):
  • 采集受試者外周血，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）。
  • 在體外用特異性抗原刺激這些細(xì)胞。
  • 檢測(cè)T細(xì)胞活化增殖標(biāo)志物（如3H-胸腺嘧啶核苷摻入法、CFSE標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)增殖）。
  • 檢測(cè)抗原特異性T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子（如IFN-γ，常用ELISpot或流式細(xì)胞術(shù)胞內(nèi)因子染色）。

觀察與判讀： 體內(nèi)試驗(yàn)通常在抗原注射/貼敷后24小時(shí)、48小時(shí)（最關(guān)鍵）和72小時(shí)（或更長(zhǎng)時(shí)間）進(jìn)行觀察和測(cè)量。主要記錄紅斑、硬結(jié)的最大直徑（Dmax）和與其垂直的直徑（Dmin），計(jì)算平均直徑（(Dmax + Dmin)/2）或記錄兩者。根據(jù)硬結(jié)平均直徑（有時(shí)結(jié)合紅斑）并結(jié)合臨床背景進(jìn)行判讀（陽(yáng)性/陰性及其強(qiáng)度）。陽(yáng)性反應(yīng)提示受試者對(duì)該抗原有致敏的T細(xì)胞存在。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)的判讀標(biāo)準(zhǔn)因具體試驗(yàn)?zāi)康模ㄔ\斷、免疫功能評(píng)估、致敏性評(píng)價(jià)）、所用抗原、受試人群（年齡、種族、基礎(chǔ)疾?。┮约白裱闹改?規(guī)范而異。以下是一些常見(jiàn)參考：

• 1. 結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)（PPD試驗(yàn)）:
  • 硬結(jié) ≥5mm: HIV感染者、近期密切接觸者、胸片有纖維化病灶者、器官移植受者等免疫抑制者陽(yáng)性。
  • 硬結(jié) ≥10mm: 來(lái)自高流行區(qū)移民、靜脈吸毒者、高危環(huán)境工作者（醫(yī)療、監(jiān)獄）、4歲以下兒童等陽(yáng)性。
  • 硬結(jié) ≥15mm: 無(wú)已知危險(xiǎn)因素的普通人群陽(yáng)性。
  • （參考：美國(guó)CDC指南）
• 2. 接觸性過(guò)敏（斑貼試驗(yàn)）： 判讀通常在移除斑試器后30分鐘（觀察刺激反應(yīng)）以及48小時(shí)、72小時(shí)或96小時(shí)進(jìn)行。國(guó)際接觸性皮炎研究組（ICDRG）評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：
  • ?+ : 可疑反應(yīng)（僅有微弱紅斑）。
  • + : 弱陽(yáng)性反應(yīng)（紅斑、浸潤(rùn)，可能有丘疹）。
  • ++ : 強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)（紅斑、浸潤(rùn)、丘疹、水皰）。
  • +++ : 極強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)（紅斑、浸潤(rùn)、融合性水皰）。
  • IR : 刺激反應(yīng)（形態(tài)不同于變態(tài)反應(yīng)）。
  • NT : 未試驗(yàn)。
• 3. 免疫狀態(tài)評(píng)估（回憶抗原試驗(yàn)）： 常使用一組常見(jiàn)抗原（如破傷風(fēng)類毒素、念珠菌、腮腺炎病毒等）。判讀標(biāo)準(zhǔn)（硬結(jié)直徑）：
  • 陽(yáng)性: 通常 ≥2-5mm（具體閾值因抗原和實(shí)驗(yàn)室而異）。
  • 無(wú)反應(yīng)性 (Anergy): 對(duì)所有測(cè)試抗原均無(wú)反應(yīng)，提示嚴(yán)重的細(xì)胞免疫缺陷。
• 4. 生物相容性/致敏性評(píng)價(jià)（ISO 10993-10, OECD TG 406）： 用于評(píng)價(jià)醫(yī)療器械、化學(xué)物質(zhì)等的潛在致敏性（皮膚致敏）。通常使用豚鼠最大化試驗(yàn)（GPMT）或局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（LLNA），判讀標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格依據(jù)這些指南中規(guī)定的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)（如LLNA中刺激指數(shù)SI≥3且存在劑量-反應(yīng)關(guān)系）。
• 5. 通用實(shí)驗(yàn)室規(guī)范/質(zhì)量控制:
  • 嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作。
  • 使用合格的標(biāo)準(zhǔn)抗原和試劑。

    檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)證書

    

    CMA認(rèn)證

    檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書

    證書編號(hào)：241520345370

    有效期至：2030年4月15日

    

    CNAS認(rèn)可

    實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書

    證書編號(hào)：CNAS L22006

    有效期至：2030年12月1日

    

    ISO認(rèn)證

    質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書

    證書編號(hào)：ISO9001-2024001

    有效期至：2027年12月31日